IDENTIFICAÇÃO MICROSCÓPICA E MOLECULAR DE BACTÉRIAS ENTOMOPATOGÊNICAS EM SOLO DA UTFPR CÂMPUS DOIS VIZINHOS

Amanda Roberta Sampaio; Samara Ernandes; Aline Mônica Zuanazzi; Nédia de Castilhos Ghisi; Lucimara Ascari Barboza

doi:10.20906/CPS/SICITE2015-0865

Resumo

Um inimigo natural das pragas agropecuárias é a bactéria Bacillus thuringiensis (Bt), utilizada no controle biológico. É caracterizada como uma bactéria entomopatogênica devido aos cristais proteicos codificados pelo gene Cry, que atuam provocando uma septicemia, com posterior paralisia e morte. Foram coletadas 14 amostras de solo no câmpus da UTFPR (Dois Vizinhos). Destas amostras, foram isoladas colônias de Bt em meio de cultura BDA. Para identificação dos cristais foi feita análise microscópica de lâminas fixadas e coradas com Amido Black e safranina. Para a detecção de genes codificadores das toxinas foi utilizada a técnica da PCR (Polymerase Chain Reaction - Reação da Polimerase em Cadeia), a qual amplifica a sequência genética de interesse com a utilização de primers específicos. O DNA das bactérias foi extraído pelo método de fervura em tampão TE (pH 8,0) e remoção do sobrenadante contendo DNA. Para identificar a presença dos genes Cry 1 e 2, este DNA foi utilizado para PCR com os primers Cry 1 [5'CTGGATTTACAGGTGGGGATAT(d)/ 5' TGAGTCGCT TCGCATATTTGACT (r)] e Cry 2 [5' GAGTTTAATCGACAAGTAGATAATTT (d) / 5' GGAAAAGAGAATATAAAAATGGCCAG (r)] com temperatura de anelamento de 52ºC. O resultado da PCR foi visualizado após corrida eletroforética em gel de agarose 1,2%, corado com brometo de etídeo e fotografado sob luz UV. O resultado revelou a presença do gene Cry 1 em 5 das 14 amostras: Erva-mate (EM4.1), Floresta (FR3.1), Restauração (RR1.4) e Pastagem (PR1.1 e PR3.1) e do gene Cry 2 em 11 das 14 amostras: Erva-Mate (EM4.1), Floresta (FR1.1 e FR3.1), Restauração (RR1.3 e RR1.4) e Pastagem (PM3.3, PR3.1, PR1.1, PM3.2, PM3.1 e PR2.1). Assim, podemos concluir que o método molecular foi eficiente para identificação dos genes Cry1 e Cry2. Este trabalho pode ser ampliado para aplicação na identificação e isolamento de linhagens que tenham potencial como bioinseticida.

Palavras-chave: Controle biológico; Sustentabilidade; Bacillus thuringiensis; Cristais proteicos